HIV-1 Resistentie bepaling (genotypering)
METHODE
In het ARL UGent wordt een in-house methode gebruikt voor de amplificatie en de daaropvolgende sequentieanalyse van volgende HIV-1 targets:
- het protease gen
- het reverse transcriptase gen (aminozuur 1 tot 300)
- het integrase gen
Voor de interpretatie van de resultaten wordt gebruik gemaakt van de Stanford database (http://hivdb.stanford.edu/)
INTERPRETATIE
Doordat de huidige testen pas resistentie oppikken als een flink deel van de aanwezige virussen resistent is, kan de bepaling een ‘fout-negatief’ resultaat geven. Resistentiebepalingen kunnen ook enkel betrouwbaar resistentie aangeven tegen de middelen die op het ogenblik van de bloedafname worden gebruikt. Vaak mist een resistentiebepaling resistentie tegen middelen die in het verleden werden ingenomen maar daarna werden gestopt.
Biologische referentie intervallen: Niet van toepassing.
GEVOELIGHEID
De methode voor resistentiebepaling heeft een hoge kans op succes (> 90%) bij mensen met een HIV virale lading van meer dan 500 kopijen/ml. Bij lagere virale lading daalt de kans om een positief amplificatieproduct voor sequentieanalyse te bekomen naar 50 % en verhoogt ook de kans op sequeneren van niet-representatieve single varianten.
SPECIFICITEIT
De methode voor sequentieanalyse werd ontwikkeld voor het analyseren van alle subtypes van de HIV-1 groep M en is niet geschikt voor sequentieanalyse van groep N en O en voor HIV-2. Occasionele problemen als gevolg van mutaties ter hoogte van de primersites zijn niet uit te sluiten.
TERMIJN VOOR RESULTAAT (TAT): 15 werkdagen
Instructies voor aanvragen
Gegevens die minimaal moeten ingevuld zijn op het aanvraagformulier:
• Persoonsidentificatie (initialen, geboortedatum, geslacht, rijksregisternummer)
• Identificatie van de aanvragende arts of laboratorium
(naam, voornaam, identificatienummer en adres)
• Type staal
• Datum en bij voorkeur ook de tijd van afname
• Klinische inlichtingen nuttig voor het uitvoeren van analysen en voor het
interpreteren van de resultaten
• Gewenste analyse
• Datum en handtekening van de aanvragende arts/klinisch bioloog
Specifieke gegevens voor drug resistentie bepaling
• Laboratorium waar de confirmatietesten werden uitgevoerd
(indien de persoon nog niet gekend is in ARL Gent)
• Gegevens betreffende antiretrovirale therapie (samenstelling van laatste
ART, startdatum ART en eventuele wijzigingen in ART)
• Resultaat en datum van de laatste CD4 bepaling
Bij de staalafname is het belangrijk om de identiteit van de persoon te verifiëren en de bloedafnamebuisjes uniek te identificeren.
Het aanvraagformulier van de test kunt u terugvinden bij "Downloads", rechts bovenaan op deze pagina.
Staalafname genotypering
- Mensen hoeven niet aan bepaalde voorwaarden te voldoen voor de bloedafname
- Collecteer minimaal 9 ml EDTA bloed (paars)
- Meng het staal goed na afname
- Bewaar en transporteer het staal op kamertemperatuur
- Het staal moet binnen de dag na afname op het ARL toekomen, af te leveren op werkdagen (ma-vr) vóór 16u30*
* In geval bovenstaand niet mogelijk is, zie onderstaande instructies voor het
verwerken van bloed in eigen laboratorium
Instructies voor het verwerken van bloed in eigen laboratorium
Isolatie van plasma
- Deze procedure moet uitgevoerd worden binnen de dag na bloedafname en met gebruik van steriel materiaal
- Centrifugeer het EDTA-bloed (paars) 10 minuten bij 1900 x g bij kamertemperatuur
- Verdeel het plasma (3-5 ml) over twee tubes (screwcap tubes, 2.0 ml of 1.7 ml)
- Vries de tubes zo snel mogelijk in bij -20°C
- Transporteer de tubes diepgevroren (met droog ijs of koelelementen) naar het ARL
- Het ontdooien van stalen tijdens het transport moet vermeden worden
Richtlijnen transport
1. Zorg ervoor dat de buisjes met het staal goed sluiten om lekken te voorkomen
Gebruik bij voorkeur buisjes met een schroefkap
Eventueel dopje en buis met parafilm omwikkelen
2. Het staal in een transportblister of koker verpakken met vochtabsorberend
materiaal
3. Het geheel in een beschermende envelop of doosje plaatsen
4. Een UN3373 sticker en de vermelding ‘Biological Substances Category B’
op de verpakking aanbrengen
versturen
Vakgroep Diagnostische Wetenschappen (GE32)
MRB2 – Ingang 38
Corneel Heymanslaan 10
9000 Gent